Friday, May 15, 2015

Nucleic acid molecular hybridization 核酸分子杂交技术 不同来源的核酸单链只要彼此间有一定的互补序列,即可按碱基配对规则以氢键相结合

PPT]核酸分子杂交技术
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核酸分子杂交技术(Nucleic acid molecular hybridization)是检测核酸分子间序列同源性的一种技术。不同来源的核酸单链只要彼此间有一定的互补序列,即可按碱基 ...


核酸分子杂交技术(Nucleic acid molecular hybridization)是检测核酸分子间序列同源性的一种技术。不同来源的核酸单链只要彼此间有一定的互补序列,即可按碱基配对规则以氢键相结合。通常是先对一种核酸进行标记(如放射性同位素35S32P或生物素等)作为探针,去探测另一种核酸序列。核酸分子杂交可以在DNADNARNARNA,或DNARNA之间进行。由于这种技术具有高度的特异性和灵敏性,已广泛应用于生物学、医学科学研究,临床传染病和遗传病的诊断。



核酸分子杂交的基本原理
         从化学和生物学意义上理解,探针(Probe)是一种分子,它带有供反应后检测的合适标记物,并仅与特异靶分子反应。抗原-抗体、外源凝集素-碳水化合物、亲和素-生物素、受体-配体(ligand)以及互补核酸间的杂交均属于探针-靶分子反应。蛋白质探针(如抗体)与特异靶分子是通过混合力(疏水、离子和氢键)的作用在少数特异位点上的结合,而核酸探针与互补链的反应则是根据杂交体的长短不同,通过氢键在几十、几百甚至上千位点上的结合。核苷酸经某一原子、功能基团或长侧链修饰后仍有可能进行碱基配对,这取决于修饰的部位和修饰物的性质。标记的探针每1kb只掺入10-30个修饰碱基,仅4-12%的单个碱基被修饰的类似物取代了。尽管掺入位点外的碱基配对较弱或不存在,但对整个杂交分子的稳定性影响很小。

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